Opgesloten in een gevangenis waarin elke kamer vier deuren heeft, maar blijkbaar geen uitgang, moeten de spelers proberen Kamer 25 te vinden, de veronderstelde uitgang uit deze nachtmerrie.

Maar sommigen onder hen zouden bewakers van de gevangenis kunnen zijn, wachtend op het juiste moment om toe te slaan. In het coöperatieve spel Room 25 wil niet iedereen uit gevangenschap ontsnappen – maar wie is de verrader?